灵芝菌种的保藏

为了保持灵芝菌种的新鲜和优质，必须对菌种进行适当的保存，减缓灵芝菌种的新陈代谢速度，避免灵芝菌种的老化和死亡。菌种可在清洁、干燥、冷冻、低温、低氧环境下保存。详细介绍以下方法：（1）试管斜面低温（冰箱）保存。母试管外面包一层塑料薄膜或牛皮纸，防止水分蒸发，然后放入4冰箱保存。在此温度下，生长几乎停止，处于“休眠”状态，新陈代谢缓慢以延长贮藏时间。保存过程中应注意几点： 1、温度不宜过低，否则斜放的培养基容易脱水变白，细菌会被冻死。 2、低温保存的菌种必须每三至四个月转移一次。 3、存放时要经常检查卫生棉条是否受潮，否则要及时更换卫生棉条（无菌卫生棉条），以免感染细菌。 4、对于长期低温保存的菌种，使用前必须将菌种置于适宜的温度下“苏醒”，使菌丝恢复活力。该方法简单易行，设备仪器简单，适用范围广。科研单位和栽培生产单位均可采用菌种低温保藏。但由于试管转移频繁，传代过多会使菌种发生降解，费时费力。 (2)石蜡保存法将待保藏的灵芝菌种转移到cpda培养基斜面，在25度左右恒温培养7天左右，然后用液体石蜡密封保存。石蜡应该是化学纯的。先121高压灭菌30-60分钟，连续灭菌两次，然后用灭菌吸管倒在斜坡上。存放于室内干燥处或冰箱内，用石蜡密封，隔离菌丝与空气接触，防止水分蒸发，减缓菌种新陈代谢，延长菌种贮藏时间。一般可存放5年以上，但1.2年内移栽一次为佳。需要菌种时，从试管中取出菌丝体，移植到PDA培养基斜面进行活化培养，即可作为菌种使用。保存过程中应注意几点： 1、为防止灵芝菌丝在石蜡封口后重新长出，应适当延长菌丝的培养时间。 2、倒入的石蜡不能低于坡尖，否则液体石蜡挥发快，坡上的培养基容易干涸。 3、石蜡灭菌要彻底，否则细菌容易传染杂菌。 4、定期检查卫生棉条是否被污染，介质是否暴露在石蜡液面。若液面外露，应及时注入无菌石蜡。 5、菌种一定要竖放，否则卫生棉条很容易被污染。 (3)白色胶塞的密封保存方法选用与试管口径相匹配的白色胶塞，用0.2%的甲酚皂液洗净，用95%的乙醇浸泡保存。当试管斜面布满菌丝时，在无菌条件下取下棉塞，取一个浸湿的白色橡胶塞，隔着火焰迅速插入试管口，用石蜡封口。此法与石蜡保存效果相同。一般菌种可保存数年，但最好每年移植一次。 (4) 麦桶保鲜菌法选用新鲜的麦桶，加适量水调节湿度，放入试管中，约占试管总长度的五分之二。方法灭菌后接种培养。 57天后，待菌丝覆盖培养基表面后，放入真空干燥器中吸干培养基中的水分，移入装有氯化钙的干燥器中，用凡士林密封，室温保存温度。此方法可将灵芝菌株的活力保存1 年以上。生产过程中注意彻底灭菌和无菌操作。 (5)木片保鲜法采用阔叶杂木片78%、麦麸20%、白糖1%、石膏1%。以每平方厘米1.5公斤高压灭菌约40分钟。冷却后，无菌接种灵芝菌种。在适宜条件下培养10-15天。用无菌的白色橡胶塞盖住并在室温下或冰箱中储存。这种方法只要木屑不干涸，细菌可以存活3年以上。保存时请注意： 1、锯片只能用阔叶木片，不能用松、杉、樟等芳香树。 2、水分适宜，杀菌彻底。

(6)木块保存法将阔叶树切成1立方厘米或1厘米1厘米2厘米的小木块，将木块用1%的葡萄糖水浸泡，浸泡，或用0.2%的二磷酸浸泡在氢钾和0.3%尿素配制液中浸泡2小时，然后按20%木屑和80%木块的比例混合，含水量约为60%-70%。 1~2厘米厚木屑，中间垫木块，放入试管中，高压灭菌40分钟，冷却后接种培养7天，取出，密封管口，贮存于冰箱。 (7)地下保存法在室内阴凉处挖一个坑，埋一个小罐子，罐口低于地面，四周填满，顶部用水泥抹平并浇上盖子，放些生石灰使用时用塑料袋装好，放在坛底，用薄膜包好要保存的菌种，放入坛内，盖好坛。通常每2-3 个月转移一次。